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    腹瀉性貝類毒素試劑盒不同分類及相關原理分析

    發布時間: 2021-05-20  點擊次數: 1120次
      腹瀉性貝類毒素試劑盒的原理是酶聯免疫吸附測定法,用于水及水產品中腹瀉性貝類毒素的定量測定。岡田酸是腹瀉性貝類毒素的一種。對于水產品需要做前處理,不可以直接檢測。如果需要的話陽性樣品可以通過HPLC和GC/MS來驗證。
     
      試劑盒中的標準溶液里含有少量的岡田酸。底物中包含有四甲基聯苯胺,終止液中含有稀硫酸。要避免皮膚和粘膜與終止液接觸,如果不小心接觸了請馬上用水沖洗。試劑盒應保存在2-8℃,不要冷凍。在使用之前要把試劑盒中的溶液回復到室溫(20-25℃)。有效期內試劑盒中的試劑都可以使用。
     
      腹瀉性貝類毒素試劑盒實驗原理:
     
      本試劑盒采用直接競爭ELISA方法,在酶標板微孔上預包被二抗,將與軟海綿酸酶標結合物競爭溶液中專屬抗體提供的吸附位點。然后,軟海綿酸-抗體將與固載于微孔板的第二抗體(山羊抗兔抗體)結合。沖洗掉微孔板上未結合的物質。經TMB 底物顯色,樣本吸光度值與其殘留物呈負相關,與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數,即可得出樣本中軟海綿酸的含量。
     
      腹瀉性貝類毒素試劑盒的分類:
     
      1、間接法測抗體
     
      間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標記的抗抗體(抗人免疫球蛋白抗體)以檢測與固相抗原結合的受檢抗體,故稱為間接法。
     
      2、雙抗原夾心法測抗體
     
      反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物,以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋,可直接用于測定,因此其敏感度相對高于間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常采用本法。本法關鍵在于酶標抗原的制備,應根據抗原結構的不同,尋找合適的標記方法。
     
      3、雙抗體夾心法測抗原
     
      雙抗體夾心法是檢測抗原常用的方法,操作步驟如下:
     
      1)將特異性抗體與固相載體聯結,形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。
     
      2)加受檢標本,保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合,形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結合物質。
     
      3)加酶標抗體,保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。
     
      4)加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產物。通過比色,測知標本中抗原的量。
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